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  1. arg7핵 선택 가능한 마커
  2. ble핵 선택 가능한 마커
  3. c. ReinhardtiiTN72 (CC-5168)
  4. 엽록체 발현 벡터 PSRSAPI 및 PASAPI
  5. TRNW를 사용한 스톱 코돈 읽기UCA
  6. apha6엽록체 선택 가능한 마커
  7. CRCD엽록체 음성 마커
  8. 코돈 사용 옵티마이저

arg7핵 선택 가능한 마커

핵 변형에 대한이 마커는 사울 푸튼 (Saul Purton)이 제네바 대학교 (University of Geneva)의 진-다비드로 차스 (Jean-David Rochaix) 실험실에서 박사후로 개발했습니다.arg7아르기닌 생합성 경로의 마지막 효소 인 Argininosuccinate Lyase를 암호화하고 클로닝 된 라이브스코어 바카라사이트는 구조에 사용될 수 있습니다arg7Arginine 프로토트 프로토리에 대한 돌연변이 체.  라이브스코어 바카라사이트를 낮은 카피 수 벡터 PBR329로 클로닝하여 PARG7.8을 제공 하였다 [1,2].  이어서, 우리는 '분자 플래그'를 인트론 중 하나에 삽입하여 소개 된 것 사이의 차별을 허용했습니다arg7DNA와 내인성arg7복사.  깃발은 392 bphaeii phix174의 조각 및 parg7.8phi3 [3].이라는 그 결과 플라스미드.

arg7선택의 용이성과 높은 변환 속도로 인해 마커 및 삽입 돌연변이겐으로 인기가 있습니다 (예 : 4].

참조 :

1. Debuchy R, Purton S, Rochaix JD (1989) Argininosuccinate lyase 라이브스코어 바카라사이트의Chlamydomonas Reinhardtii: 핵 변형과 라이브스코어 바카라사이트 및 분자 맵을 상관시키는 중요한 도구arg7locus.Embo J. 8 : 2803-2809.

2. Purton, S. & Rochaix, J.-D. (1995). 의 특성arg7의 라이브스코어 바카라사이트Chlamydomonas Reinhardtii그리고 핵 변형에 적용.유럽 식물학 저널 30 : 141-148.

3. Gumpel NJ, Rochaix JD, Purton S (1994) 녹색 조류에서 상 동성 재조합에 관한 연구Chlamydomonas Reinhardtii. 현재 라이브스코어 바카라사이트학 26 : 438-442.

4. Lumbreras V, Purton S (1998) 최근의 진보Chlamydomonas트랜스 제닉.프로 티스트 149 : 23-27.

genbank 수탁 번호arg7이다x16619.

Word Files for 다운로드parg7.8 및 parg7.8phi3지도 및 시퀀스.

ble핵 선택 가능한 마커

핵 변형을위한이 지배적 인 선택 가능한 마커는 DNA- 손상된 항생제의 블레오 마이신 패밀리에 대한 내성을 부여합니다.  마커의 원래 버전은 Ref 5에 설명되어 있으며, 그 후에도 참조 6에서 후속 개선이 개선됩니다.

자세한 내용을 다운로드

5. Stevens DR, Rochaix JD, Purton S (1996) 박테리아 필로 마이신 저항성 라이브스코어 바카라사이트ble지배적 인 선택 가능한 마커로Chlamydomonas. Mol Gen Genet. 251 : 23-30.

6. Lumbreras V, Stevens DR, Purton S (1998) 효율적인 외래 라이브스코어 바카라사이트 발현Chlamydomonas Reinhardtii내인성 인트론에 의해 매개됩니다.Plant J 14 : 441-447.

플라스미드 pdble은 핵 발현 벡터 pgend의 수정 된 버전입니다.Fischer and Rochaix (2001). 표현 카세트의 하류에서 BLE 마커를 삽입하여 벡터를 수정했습니다. 자세한 내용과 PDBLE의 DNA 시퀀스는 Word 파일을 다운로드하십시오. 깨진 링크

c. ReinhardtiiTN72 (CC-5168)

TN72 (참조 7 참조) PASAPI, PSRSAPI 및 PWUCA2 발현 벡터를 사용하여 엽록체 변환을위한 수용자 변형 역할을합니다.

이 돌연변이 체는 엽록체 변형 체입니다.aada(SPCR) 카세트는 중간에있는 BSTXI 사이트 사이에 삽입되었습니다.PSBH코딩 시퀀스 및 MLUI 사이트의PSBH-TRNE2intergenic 영역, 이에 따라 많은 부분을 포함하여 0.36 kb 게놈 영역을 삭제하는PSBH.AADA라이브스코어 바카라사이트는와 같은 방향입니다.PSBH. TN72는 PSBH의 손실로 인한 PSII- 마이너 (즉, 아세테이트 수용) 및 AADA의 존재로 인해 스펙 티노 마이신 내성이다. TN72는 CW15 (세포벽 돌연변이 체) 균주이며, Autolysin의 필요없이 유리 비드를 사용하여 간단한 변형을 허용합니다.

7. Wannathong T, Waterhouse JC, Young Reb, Economou CK, Purton S (2016). 엽록체 라이브스코어 바카라사이트 공학을위한 새로운 도구는 녹색 조류에서 인간 성장 호르몬의 합성을 허용합니다Chlamydomonas Reinhardtii. 응용 미생물학 및 생명 라이브스코어 바카라사이트 100 : 5467-5477

TN72 구매에 관심이 있으시면 문의하십시오.Chlamydomonas Resource Center.

엽록체 발현 벡터 PSRSAPI 및 PASAPI

psrsapi는 트랜스 진을 표현하기위한 벡터입니다.c. Reinhardtiichloroplast (위의 참조 7 참조). 트랜스 진은 SAPI 및 SPHI 제한 효소 (또는 이소시조 체 LGUI 및 PAEI)를 사용하여 발현 부위에 삽입되어야한다. 그런 다음 옆에 측면이됩니다.c. Reinhardtii PSAA엑손 1 프로모터 및 5 'UTR (ATG 스타트 코돈에서 완벽한 흉터가없는 융합) 및c. Reinhardtii RBCL3 ′ utr. 구조물의 외부 측면 영역에는 손상되지 않습니다PSBH라이브스코어 바카라사이트 및 표현 카세트의 다운 스트림을 표적으로합니다.PSBH상 동성 재조합에 의해.

Plasmid Pasapi는ATPA프로모터 및 5'utr 대신PSAA엑손 1 요소; PSRSAPI는 일반적으로 더 강한 트랜스 진 발현을 제공합니다.

복원을 위해 최소 매체 사용PSBH안에C. Reinhardtii, 광 영양 성장 선택. 따라서 수신자 셀 라인은 A 여야합니다.PSBHTN72와 같은 돌연변이 체

PSRSAPL 구매에 관심이 있으시면 문의하십시오.Chlamydomonas Resource Center.

trnw를 사용한 스톱 코돈 읽기UCA

Pwuca2 플라스미드에서 트랜스 진 발현을위한c. Reinhardtii엽록체는 생물 컨테이션에 사용되며 제품이 독성이있는 라이브스코어 바카라사이트의 복제를 돕기 위해e. coli(참조 8).

pwuca2는를 소개하는 데 사용될 수 있습니다trnwUCA의 라이브스코어 바카라사이트 다운 스트림PSBH에서c. Reinhardtii엽록체 게놈. APSBH돌연변이 체 수용자 라인 (예 : TN72는 최소 매체에서 선택할 수 있도록 사용해야합니다. TRNWUCA내부 UGA 코돈의 읽기를 허용하는 합성 TRNA입니다. 이 플라스미드는 또한 a를 가진 빈 식 카세트도 포함합니다.PSAA엑손 1 프로모터 및 5 'UTR, 관심있는 라이브스코어 바카라사이트를 삽입 할 수 있습니다 (예 : 내부 TGA 코돈이있는).

대체 플라스미드 Pwuca1은를 소개하는 데 사용될 수 있습니다TRNWUCAgene 다운 스트림PSAA엑손 3에서c. Reinhardtii스펙 티노 마이신 선택을 이용한 엽록체 게놈.

8. Young Reb, Purton S (2016). 코돈 재 할당하여 라이브스코어 바카라사이트 공학 및 바이오 컨테이션을 촉진하기위한 코돈 재 할당Chlamydomonas Reinhardtii. Plant Biotechnology Journal 14 : 1251-1260

pwuca1 또는 pwuca2 구매에 관심이 있으시면 문의하십시오.Chlamydomonas Resource Center.

APHA6엽록체 선택 가능한 마커

마커는 엽록체 변형을 위해 개발되었으며 Kanamycin과 Amikacin에 대한 저항성을 부여하며 Ref 9에 설명되어 있습니다.

마커 다운로드

9. Bateman JM, Purton S (2000) 엽록체 변환을위한 라이브스코어 바카라사이트Chlamydomonas: 발현 벡터 및 새로운 지배적 인 선택 가능한 마커.Mol Gen Genet. 263 : 404-410.

CRCDchloroplast 음성 마커

Chlamydomonas Reinhardtii엽록체는 Ref 10에 설명되어 있습니다. 수정 된 버전의e. coli사이토신 데 아미나 제 (코다) 라이브스코어 바카라사이트. CRCD 효소는 독성 5-Fluorouracil로 변환함으로써 5- 플루오로 시토신에 대한 민감성을 부여합니다.

Plasmid Pry127D Broken Link의 자세한 내용을 다운로드합니다. 여기에는 Ha-tagged crcd를 인코딩하는 라이브스코어 바카라사이트가 포함되어 있으며에서 사용할 수 있습니다.Chlamydomonas센터.

10. Young R, Purton S (2014) Microalgal 엽록체에 대한 음성 선택 가능한 마커로서의 Cytosine Deaminase : 엽록체 라이브스코어 바카라사이트 발현에 영향을 미치는 핵 돌연변이의 분리 전략.Plant J 80 : 915-925.

PRY127D (PCD) 구매에 관심이 있으시면 문의하십시오.Chlamydomonas Resource Center.

코돈 사용 옵티마이저

Cuo는 Java로 작성된 GUI 기반 Multiplatform 소프트웨어입니다. 오픈 소스이며 사용자/개발자 친화적 인 구조로 구축됩니다. 현재 개발 단계에서 소프트웨어의 주요 기능은로 변환 할 라이브스코어 바카라사이트를 최적화하는 것입니다.Chlamydomonas Reinhardtii엽록체 게놈은 다른 숙주로 라이브스코어 바카라사이트를 최적화하는 데 사용될 수 있지만. CUO의 주요 도구 인 Moptimizer는 최적화 과정에서 더 많은 유연성과 정확성을 제공하는 반자동 라이브스코어 바카라사이트 최적화 방식을 도입합니다. CUO의 향후 계획은 생물학 실험실에서 데이터, 결과, 계획 및 학습을 생성하고 공유 할 수있는 다목적 생물 정보학 소프트웨어로 개발 될 예정입니다.  CUO는 아래 링크를 사용하여 다운로드 할 수 있습니다.

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